牛血清那些你不知道的事

　　血清的用途

　　科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞。

　　牛血清是一種成分復(fù)雜的混合物，其大部分成分已為人所知，但還有一部分仍不清楚，而且血清的組成及含量通常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而存在差異。

　　血清的主要成分

　　蛋白質(zhì)類(lèi)

　　包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進(jìn)細(xì)胞附著)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(能結(jié)合鐵離子，減少其毒性和被細(xì)胞利用)、纖維粘連素(促進(jìn)細(xì)胞附著生長(zhǎng))等;

　　多肽類(lèi)

　　主要是一些促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的生長(zhǎng)因子，最主要的生長(zhǎng)因子是血小板生長(zhǎng)因子，還有成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，雖然在血清中含量很少，但對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂也起著重要作用;

　　激素類(lèi)

　　激素對(duì)細(xì)胞的作用是多方面的。包括：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細(xì)胞分裂有關(guān);類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子：能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合，從而有胰島素同樣的作用：促生長(zhǎng)激素：促進(jìn)細(xì)胞增殖的效應(yīng);血清中含有微量該成分，它可能具有促細(xì)胞貼附和增殖作用。但有人證明，血清中的氫化可的松，在細(xì)胞密度較高時(shí)可能有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生分化的作用。

　　其他成分

　　如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培養(yǎng)基中這些成分的作用并不明顯，與蛋白相結(jié)合的微量元素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)起促進(jìn)作用。

　　使用注意事項(xiàng)

　　血清的保存

　　在-15℃以下血清的有效期為5年，4℃可保存數(shù)周，不宜室溫保存，不宜反復(fù)凍融。配制成培養(yǎng)基后應(yīng)在四周內(nèi)用完，一瓶血清如無(wú)法一次用完應(yīng)無(wú)菌分裝成恰當(dāng)數(shù)量并冷凍保存。

　　血清中的絮狀沉淀物

　　血清是多種蛋白質(zhì)的混合物，在凍融過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀物，主要原因是由于血清中脂蛋白和纖維蛋白變性所造成。但并不影響血清本身的質(zhì)量和使用。如需去除可先400g離心取上清液配制成培養(yǎng)基再過(guò)濾即可使用。

　　血清的解凍

　　合理的解凍方式可以更好的保護(hù)血清質(zhì)量并可以在上減少絮狀沉淀物的產(chǎn)生。血清從低溫冰箱中取出后，經(jīng)4℃冰箱、室溫、37℃水浴逐步規(guī)則搖晃均勻融解，直至融解后再使用。

　　血清的熱滅活

　　將血清嚴(yán)格56℃水浴均勻加溫30分鐘可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng)。是不是所有用途的血清都需要熱滅活呢?對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)是不需要的。激活的補(bǔ)體能參與溶解細(xì)胞，刺激光滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。因此在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌肉細(xì)胞時(shí)，建議使用熱滅活血清，在正常情況下加熱處理對(duì)血清的促細(xì)胞生長(zhǎng)效應(yīng)無(wú)明顯促進(jìn)作用，甚至?xí)驗(yàn)榧訜崽幚碛绊懷宓馁|(zhì)量。

　　血清中的“小黑點(diǎn)”現(xiàn)象

　　血清在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的低溫凍存再融解后，在正常情況下會(huì)出現(xiàn)絮狀蛋白沉淀。但往往有用戶(hù)反應(yīng)血清中有“小黑點(diǎn)”現(xiàn)象，認(rèn)為是微生物污染。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血清在37℃環(huán)境放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或經(jīng)過(guò)加熱滅活處理，血清中的沉淀物往往會(huì)呈增多趨勢(shì)，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，讓使用者誤以為是血清遭受微生物污染并在分裂增殖。因此如無(wú)必要，可以不進(jìn)行熱滅活處理并保證血清的低溫保存。

　　注：以上資料僅供參考，不同品牌產(chǎn)品可能存在設(shè)計(jì)差異，操作前建議參考說(shuō)明書(shū)‌。

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